G3基因群猪博卡病毒SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法的建立及应用

付朋飞; 高定焯; 张卓威; 时逸洋; 户安鑫; 林家文; 张语嫣; 洪军; 李志钢

doi:10.26942/j.cnki.issn.1002-2481.2025.06.22

山西农业科学 ›› 2025, Vol. 53 ›› Issue (06) : 183 -190. DOI: 10.26942/j.cnki.issn.1002-2481.2025.06.22

G3基因群猪博卡病毒SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法的建立及应用

付朋飞, 高定焯, 张卓威, 时逸洋, 户安鑫, 林家文, 张语嫣, 洪军, 李志钢

作者信息 +

Author information +

文章历史 +

PDF

摘要

猪博卡病毒（Porcine bocavirus,PBoV）广泛存在于全球猪群中，其中，G3基因群（PBoV G3）会导致猪群发生腹泻，已成为威胁养猪业的重要病原。为了建立一种高效的PBoV G3检测方法，为深入揭示PBoV G3的流行特征及相关疾病防控提供可靠的技术支持，研究基于GenBank收录的PBoV G3 VP1基因保守区设计特异性引物，并以重组质粒pCE3 Blunt-VP1为标准模板，经条件优化构建了检测PBoV G3的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR(qPCR)检测方法。方法学评价结果表明，该体系可实现4.51拷贝/μL的最低检测限，灵敏度较常规PCR提高约100倍；对PBoV G1、PBoV G2及多种常见猪肠道病毒均无交叉扩增，特异性良好；批内和批间变异系数均小于2%，重复性稳定。临床样品检测结果显示，在212份腹泻猪粪便中，该方法的检出率为41.0%(87/212)，显著高于常规PCR的33.5%(71/212)，二者符合率达92.5%。综上所述，该方法兼具灵敏、特异和稳定的优势，适合大规模临床样品筛查。