地红蝽实时荧光定量PCR内参基因筛选

摘要

为了筛选出地红蝽在雌雄成虫不同组织、不同性别和不同龄期个体中稳定表达的内参基因，基于地红蝽转录组数据以及参考昆虫常用内参基因，筛选出Hsc70、AK、GAPDH、α-Tub、EF1-α、SDHA、RPL32、β-Act等8个候选内参基因。采用荧光定量PCR(RT-qPCR)测定8个候选基因在地红蝽雌雄成虫的不同组织（包括头、胸、腹、足、翅、触角）、不同龄期（1～5龄和成虫）和不同性别个体中的表达量，并利用GeNorm、NormFinder、BestKeeper、RefFinder等软件对其表达稳定性进行分析。结果表明，在地红蝽不同样品中各候选内参基因表达量存在差异，在地红蝽不同龄期内参基因稳定性排前3位的依次是EF1-α、SDHA、GAPDH基因，不同性别成虫中内参基因稳定性排前3位的依次是SDHA、RPL32、EF1-α基因，在雌成虫不同组织中内参基因稳定性排前3位的依次是EF1-α、α-Tub、β-Act基因，在雄成虫不同组织中内参基因稳定性排前3位的依次是EF1-α、GAPDH、β-Act基因。结合不同算法综合比较，在地红蝽不同龄期中，建议以EF1-α和SDHA基因作为内参基因；在不同性别成虫中，建议以SDHA和RPL32基因作为内参基因；在雌性成虫不同组织中建议以EF1-α和α-Tub作为内参基因；在雄性成虫不同组织中建议以EF1-α和GAPDH作为内参基因。

关键词

地红蝽 / 组织 / 内参基因 / RT-qPCR / 表达稳定性