活络效灵丹促进斑马鱼尾鳍再生的核心靶点与免疫调控机制

摘要

目的 基于网络药理学和体内实验验证分析活络效灵丹促进组织修复的潜在核心靶点与免疫调控机制。方法 基于网络药理学筛选活络效灵丹的活性成分以及疾病作用靶点，利用STRING数据库构建PPI筛选核心蛋白，并进行GO、KEGG富集分析以及分子对接预测活络效灵丹的药理机制。体内实验：通过斑马鱼药毒实验评估活络效灵丹的毒性作用，并将3 dpf幼鱼尾鳍切除95%建立斑马鱼尾鳍截断模型，设置模型组（胚胎水）、活络效灵丹低、中、高浓度干预组（10、20、40μg/mL），通过再生面积观察和qPCR检测评估活络效灵丹促进组织再生的药效及核心靶点。利用巨噬细胞和中性粒细胞双荧光标记的转基因斑马鱼，观察免疫细胞在不同修复阶段的迁移情况，qPCR检测组织再生不同时间段巨噬细胞的分型。结果 筛选出活络效灵丹中活性成分与组织修复共有149个交集靶点，其中核心靶点有AKT1、IL-6、TNF-α、EGFR、STAT3，结合GO和KEGG富集分析提示活络效灵丹主要通过JAK-STAT信号通路、黏附连接、对细胞迁移的正向调控等发挥作用。药毒实验显示，药物安全浓度为40μg/mL，致死浓度为320μg/mL，超过80μg/mL活络效灵丹可导致斑马鱼幼鱼出现肾脏、心包水肿及血管发育不良。体内实验中，与模型组相比，活络效灵丹药物干预组斑马鱼尾鳍修复面积增高（P<0.05），同时显著抑制IL-6、TNF-α，激活AKT1、EGFR、STAT3基因的表达（P<0.05）。活络效灵丹可以调节再生部位中性粒细胞和巨噬细胞的聚集，并在组织再生不同时间段调节M1和M2型巨噬细胞的极化（P<0.05）。结论 在斑马鱼尾鳍再生过程中，活络效灵丹通过多成分、多靶点和多通路机制显著促进组织修复。其功能可能涉及调节伤口局部的免疫细胞迁移及巨噬细胞极化，从而有效减轻炎症反应，促进愈合进程。

关键词

活络效灵丹 / 组织修复 / 免疫机制 / 核心靶点 / 斑马鱼