升麻素抑制MAPK通路调节辅助性T细胞免疫平衡改善小鼠克罗恩病样结肠炎

摘要

目的 探索升麻素（CIM）对小鼠克罗恩病（CD）样结肠炎的作用以及可能的机制。方法 30只体质量20～23 g(6～8周龄)的C57BL/6雄性小鼠随机分为空白对照组、2,4,6-三硝基苯磺酸（TNBS）组和CIM组，10只/组。TNBS组使用TNBS灌肠建立CD样结肠炎模型，CIM组经TNBS灌肠后每日灌胃CIM(12.5 mg/kg)。通过记录小鼠体质量变化和疾病活动指数（DAI）评分，测量结肠长度，进行HE染色炎症评分以及检测肠黏膜中炎症因子水平评估CIM对小鼠结肠炎的作用；采用免疫荧光及免疫印记检测小鼠肠屏障损伤；流式细胞术检测各组小鼠肠系膜淋巴结中辅助性T细胞亚群的比例；通过网络药理学预测CIM潜在作用靶点，KEGG富集分析筛选关键通路，分子对接验证CIM与MAPK通路核心蛋白的结合能力；Western blotting验证MAPK信号通路的改变。结果 CIM干预改善了TNBS诱导的小鼠体质量降低和结肠缩短，同时DAI评分和结肠组织炎症评分低于TNBS组（P<0.05）。ELISA和PCR检测结果显示，同TNBS组相比，CIM降低小鼠肠黏膜组织中促炎因子（IFN-γ和IL-17）的水平并促进抗炎因子（IL-4和IL-10）表达（P<0.05）。免疫荧光结果显示，CIM可改善TNBS诱导的小鼠上皮细胞Claudin-1的缺失和移位，以及杯状细胞的减少（P<0.05）；免疫印记数据提示CIM组小鼠结肠黏膜中Claudin-1和ZO-1表达高于TNBS组（P<0.05）。流式细胞术检测结果表明CIM干预后肠系膜淋巴结中Th1和Th17细胞比例下降，而Th2及Treg细胞比例升高（P<0.05）。KEGG富集分析发现CIM对肠炎的作用可能与MAPK信号通路相关，分子对接显示，CIM与MAPK通路核心靶点之间有很好的结合，免疫印记结果显示p-JNK、p-ERK和p-p38在CIM组的小鼠肠黏膜中表达低于TNBS组（P<0.05）。结论 CIM可改善肠屏障损伤从而缓解TNBS诱导的小鼠克罗恩病样结肠炎，这与其抑制MAPK信号通路的激活调节小鼠肠道Th1/Th2和Th17/Treg平衡有关。

关键词

克罗恩病 / 升麻素 / MAPK / 辅助性T细胞 / 免疫平衡 / 肠屏障