旱莲苷A通过调控JAK2/STAT3通路抑制M1型巨噬细胞极化改善葡聚糖硫酸钠诱导的小鼠结肠炎

摘要

目的 探讨旱莲苷A(ESA)对葡聚糖硫酸钠（DSS）诱导的小鼠炎症性肠病（IBD）模型的影响及其对巨噬细胞极化的作用机制。方法 体内实验采用24只8～10周龄雄性C57BL/6小鼠，随机分成对照组（WT组）、2.5%DSS诱导模型组（DSS组）、ESA治疗组（DSS+ESA组，50 mg/kg）,8只/组。每日记录小鼠体质量，观察粪便性状，通过DAI评分、结肠长度、脾指数、结肠组织HE染色及组织炎症评分、ELISA和RT-qPCR检测的肠黏膜炎症介质（TNF-α、IL-6和iNOS）水平评估ESA对小鼠肠炎症状的影响；采用AB-PAS染色标记杯状细胞，免疫荧光和Western blotting检测紧密连接蛋白水平（ZO-1和Claudin-1），评估ESA对小鼠肠道屏障的作用。体外培养小鼠单核巨噬细胞白血病细胞RAW264.7，分为Control组（M0组）、LPS(1μg/mL)+IFN-γ(20 ng/mL)诱导组（M1组）和ESA治疗组（ESA组，50μmol/L），采用流式细胞术评估ESA对小鼠肠系膜淋巴结及体外模型M1型极化标志物（CD86）比例的影响。Western blotting检测JAK2/STAT3通路关键蛋白表达，并使用信号通路激活剂RO8191(20μmol/L)干预，分析ESA调控巨噬细胞极化的分子机制。结果 体内实验显示，ESA可明显缓解DSS诱导的小鼠体质量下降、结肠长度缩短及DAI评分、脾指数、组织炎症评分的升高（P<0.05）;HE结果显示，ESA可保护肠道固有层，减轻肠道炎症细胞浸润；ELISA和RT-qPCR显示，ESA可抑制DSS诱导的小鼠肠黏膜组织相关炎症介质（TNF-α、IL-6和iNOS）的高表达（P<0.05）;AB-PAS和免疫荧光结果显示，ESA可保护结肠组织杯状细胞、黏液屏障和机械屏障的损伤。流式细胞术结果发现，ESA可降低DSS诱导的小鼠肠系膜淋巴结和体外诱导的M1型巨噬细胞极化标志物（CD86）的阳性比例（P<0.05）。Western blotting结果显示，体内外ESA治疗组p-JAK2和p-STAT3水平低于诱导组（P<0.05）；体外经JAK2/STAT3激活剂RO8191干预后显示，ESA药物治疗未能抑制JAK2/STAT3信号通路活化，同时M1型极化标志物CD86阳性比例增加（P<0.05）。结论 ESA可靶向拮抗JAK2/STAT3通路活化介导的M1型巨噬细胞极化，抑制炎症因子导致的肠道屏障的损伤，从而缓解DSS诱导的小鼠结肠炎。

关键词

旱莲苷A / 炎症性肠病 / 肠屏障 / 巨噬细胞极化 / JAK2/STAT3