Circ＿EPHB4通过miR-424-5p/Wnt3信号轴调控胶质瘤细胞对替莫唑胺的化疗敏感性

摘要

目的 探讨Circ＿EPHB4通过miR-424-5p/Wnt3信号轴调控胶质瘤细胞替莫唑胺敏感性的机制。方法 收集我院2019年1月～2021年12月25例原发性胶质瘤患者和25例经替莫唑胺（TMZ）基化疗治愈后的复发性胶质瘤患者组织标本。qRT-PCR检测Circ＿EPHB4表达敲低及敲低对照组细胞中circ＿EPHB4、miR-424-5p及Wnt3 mRNA的表达水平。Western blotting检测Wnt3蛋白表达水平。细胞活力、克隆形成和细胞凋亡分别通过CCK-8、克隆形成和流式细胞仪检测评估。采用双荧光素酶报告和RNA免疫沉淀（RIP）试验验证circ＿EPHB4、miR-424-5p和Wnt3间的靶向调控关系。皮下成瘤实验评估circ＿EPHB4对胶质瘤肿瘤形成能力的影响。结果 胶质瘤组织和细胞中circ EPHB4的表达明显高于正常神经组织和星形胶质细胞（P=0.014）。与si-NC对照组相比，si-Circ＿EPHB4降低了TMZ耐药胶质瘤细胞中circ＿EPHB4表达水平（A172:P=0.008;SHG44:P=0.009）。circ＿EPHB4表达敲低降低了TMZ耐药胶质瘤细胞对TMZ的IC₅₀值（A172:P=0.012;SHG44:P=0.022），抑制了胶质瘤细胞克隆形成（A172:P=0.004;SHG44:P=0.006），并促进胶质瘤细胞凋亡（A172:P=0.002;SHG44:P=0.00）。胶质瘤组织中miR-424-5p和circ＿EPHB4表达呈负相关（r=-0.556,P=0.011）。miR-424-5p表达敲低，逆转了circ＿EPHB4表达敲低引起的IC₅₀值下降（P=0.001）、克隆形成抑制（P=0.016）和细胞凋亡促进作用（P=0.001）。此外，miR-424-5p表达敲低，还削弱了circ＿EPHB4表达敲低对PCNA、P-gp、MRP1和bax表达的影响（P=0.004）。结论 circ＿EPHB4通过“海绵吸附”miR-424-5p调控Wnt3表达，由此调节TMZ耐药胶质瘤细胞克隆形成、细胞凋亡和TMZ敏感性，circ＿EPHB4是逆转胶质瘤耐药的潜在靶点。

关键词

胶质瘤 / 化疗抵抗 / circ＿EPHB4 / miR-424-5p / Wnt3