强骨康疏方通过抑制HIF-1α/BNIP3自噬信号通路减少类风湿性关节炎大鼠的破骨细胞分化

摘要

目的 研究强骨康疏方（QGKSF）对HIF-1α/BNIP3自噬信号通路的调控作用及其改善类风湿关节炎的作用机制。方法 制备含药血清，RAW264.7细胞体外培养，低氧+RANKL诱导破骨细胞。分别设置对照组、模型组、甲氨蝶呤组（MTX）、 QGKSF低剂量组（QGKSF-L）、QGKSF高剂量组（QGKSF-H）。CCK-8法检测细胞活力；TRAP染色观察各组TRAP阳性多核细胞的数量；鬼笔环肽染色检测F-肌动蛋白环形成情况；MDC染色观察自噬泡；透射电镜观察自噬小体；ELISA检测炎症细胞因子（IL-6、TNF-α）水平；Western blotting检测HIF-1α、BNIP3、Bcl-2、Beclin1、LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ、P62、TRAP的蛋白水平；RT-qPCR检测HIF-1α、BNIP3、Bcl-2、Beclin1、LC3、P62、TRAP的mRNA水平。结果 与对照组比较，模型组可见大量TRAP阳性细胞，F-肌动蛋白环形成增多，自噬荧光强度增加，自噬小体增多（P<0.001）；与模型组比较，MTX组、QGKSF-L组和QGKSF-H组的TRAP阳性细胞数量和F-肌动蛋白环形成减少，自噬荧光强度减弱，自噬小体减少（P<0.01）。与对照组相比，模型组IL-6、TNF-α水平升高（P<0.001）；经过MTX和QGKSF治疗后IL-6、TNF-α水平有所降低（P<0.001）。与对照组相比，模型组HIF-1α、BNIP3、Bcl-2、Beclin1、LC3、TRAP蛋白及mRNA水平升高，P62蛋白及mRNA水平降低（P<0.01）；经MTX及QGKSF治疗后，HIF-1α、BNIP3、Bcl-2、Beclin1、LC3、TRAP蛋白及mRNA水平降低，P62蛋白及mRNA水平升高（P<0.05）。结论 低氧条件下，QGKSF可能通过抑制HIF-1α/BNIP3自噬信号通路来减少RANKL诱导的RAW264.7向破骨细胞分化，从而发挥治疗RA骨破坏的作用。

关键词

强骨康疏方 / 类风湿关节炎骨破坏 / 自噬 / HIF-1α/BNIP3信号通路 / 破骨细胞