雷氏大疣蛛多肽毒素组分通过激活促凋亡通路和协同作用抑制癌细胞增殖

摘要

目的 研究雷氏大疣蛛毒素对癌细胞增殖抑制的选择性和有效组分。方法 采用CCK-8法检测共培养48 h后雷氏大疣蛛毒素对癌细胞增殖的影响；应用流式细胞术检测癌细胞凋亡率；采用caspase试剂盒检测癌细胞内caspase-8和9的表达水平；通过凝胶过滤层析和高效液相色谱（HPLC）将雷氏大疣蛛粗毒分为蛋白质组分、多肽组分、小分子化合物组分3个部分；通过蛋白质组学对蛋白质和多肽组分进行鉴定；采用核磁共振、质谱结合HPLC解析小分子化合物组分中各物质的结构。结果 雷氏大疣蛛粗毒对乳腺癌MCF7和鼻咽癌（SUNE1、HONE1）细胞表现出很强的浓度依赖性增殖抑制作用，半抑制浓度(IC₅₀)分别为2.14±0.29、1.57±0.14、2.85±0.15μg/mL；对多种胃癌和肠癌细胞系表现出较强的增殖抑制作用，对胃癌HGC27细胞的IC₅₀为3.02±0.27μg/mL，对肠癌SW620细胞的IC₅₀为3.02±0.28μg/mL。选用MCF7细胞来研究增殖抑制机制和筛选有效组分，发现粗毒可能通过激活caspase-8介导的信号通路诱导MCF7细胞凋亡。粗毒中蛋白质组分对MCF7细胞的增殖抑制作用很弱，10μg/mL浓度仅抑制12.1%±1.9%。多肽组分抑制作用较强，IC₅₀为6.41±0.31μg/mL。多肽组分相对分子质量集中在10000左右，主要为与巨型上户蛛毒素同源的多肽；小分子组分未表现出增殖抑制作用，主要为核苷酸代谢物。多肽组分和小分子组分质量比4∶1混合抑制作用明显增强。结论 雷氏大疣蛛毒素对不同癌细胞的抑制活性有很大差异，发挥对癌细胞增殖抑制作用的组分为多肽组分，可能与核苷酸代谢物存在协同作用。

关键词

雷氏大疣蛛 / 多肽毒素 / 癌细胞 / 抗增殖作用