LncRNA SNHG15通过miR-30b-3p调控COX6B1轴促进肺腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的分子机制

摘要

目的 探索LncRNA SNHG15是否可以与COX6B1竞争性结合miR-30b-3p调控肺腺癌细胞增殖、迁移和侵袭。方法 利用LncRNAs微阵列芯片数据集GSE196584和LncBase预测与miR-30b-3p互用的LncRNA。通过在线数据库查询其与患者预后的关系及其表达量，筛选出长链非编码RNA(LncRNA)核仁RNA宿主基因15(SNHG15)作为接下来的研究对象。FISH检测LncRNA SNHG15的亚细胞定位。使用qRT-PCR检测LncRNA SNHG15在人正常肺上皮细胞和肺腺癌细胞系中的表达水平；将A549细胞分为4组并共转染：sh-NC+miR-NC组（空载质粒+miR-30b-3p对照质粒共转染）、sh-SNHG15+miR-NC组（SNHG15敲低质粒+miR-30b-3p对照质粒共转染）、sh-NC+miR-30b-3p-inhibitor组（空载质粒+miR-30b-3p抑制质粒共转染）、sh-SNHG15+miR-30b-3p-inhibitor组（SNHG15敲低质粒+miR-30b-3p抑制质粒共转染），通过EdU、伤口愈合及Transwell实验检测细胞增殖、迁移与侵袭能力。使用生物信息学数据库预测LncRNA SNHG15与COX6B1的调控关系，Western Blot实验验证敲低LncRNA SNHG15后，COX6B1的表达水平。进一步开展SNHG15与COX6B1的挽救实验，将A549细胞分为4组共转染：sh-NC+CON组（SNHG15对照质粒+COX6B1空载质粒共转染）、sh-SNHG15+oe-CON组（SNHG15敲低质粒+COX6B1空载质粒共转染）、sh-NC+oe-COX6B1组（SNHG15对照质粒+COX6B1过表达质粒共转染）、sh-SNHG15+oe-COX6B1组（SNHG15敲低质粒+COX6B1过表达质粒共转染），进行EdU实验、伤口愈合实验、Transwell实验检测各组A549细胞增殖、迁移、侵袭能力的变化。结果 LncRNA SNHG15与miR-30b-3p存在靶向关系。LncRNA SNHG15高表达与肺腺癌患者不良预后有关且在肺腺癌组织中高表达。LncRNA SNHG15主要定位在细胞质。LncRNA SNHG15在A549、NCI-H1299细胞中的表达高于在BEAS-2B中的表达（P<0.05）。下调miR-30b-3p可以逆转敲低LncRNA SNHG15导致的A549细胞增殖、迁移和侵袭能力的减弱（P<0.05）。LncRNA SNHG15和COX6B1存在调控关系且呈正相关（r=0.128,P=0.003）。Western blotting实验证实敲低LncRNA SNHG15可以使COX6B1的表达水平下降（P<0.05）。过表达COX6B1可以挽救下调LncRNA SNHG15导致的A549细胞迁移，侵袭和增殖能力的下降（P<0.05）。结论 LncRNA SNHG15可能通过ceRNA机制与COX6B1竞争性结合miR-30b-3p，从而进一步影响肺腺癌的增殖、迁移、侵袭。

关键词

肺腺癌 / LncRNA SNHG15 / miR-30b-3p / COX6B1 / 迁移 / 侵袭