钙离子调控KLK4表达对成釉细胞生长的影响

摘要

目的探讨钙离子对成釉细胞中激肽释放酶4（kallikrein-4,KLK4）表达及细胞生长的影响，为钙离子促进牙釉质正常矿化提供实验依据。方法采用不同浓度CaCl₂（0、2.0、2.5、3.0、3.5 mmol/L）处理成釉细胞株ALC（ameloblast-lineage cell） 24 h、48 h,q RT-PCR和Western blot检测KLK4 mRNA和蛋白表达水平；CCK-8检测细胞相对活力；流式细胞术、Hoechst 33342染色检测钙离子对细胞周期和细胞凋亡的影响；Western blot检测葡萄糖调节蛋白78（glucose-regulated protein 78,GRP78）的蛋白表达水平。结果与对照组（0 mmol/L CaCl₂）相比，2.5、3.0、3.5 mmol/L CaCl₂处理细胞24 h后，KLK4 mRNA表达上升（P<0.05）,2.0、2.5、3.0、3.5 mmol/L CaCl₂处理细胞24 h后，KLK4蛋白表达上升（P<0.05）;3.0、3.5 mmol/L CaCl₂处理细胞48 h后，KLK4 mRNA和蛋白表达上升（P<0.05）。与对照组相比，2.0、2.5、3.0 mmol/L CaCl₂处理ALC细胞24 h、48 h后，细胞活力增加（P<0.05），其中2.5 mmol/L CaCl₂组中细胞活力最高。Hoechst 33342染色结果显示，3.0、3.5 mmol/L CaCl₂促使ALC细胞发生凋亡。流式细胞仪检测结果显示，与0、2.0、2.5、3.0 mmol/L CaCl₂组相比，3.5 mmol/L CaCl₂处理ALC细胞24 h后，G2/M期细胞比例增加，细胞凋亡率上升（P<0.05）。3.0、3.5 mmol/L CaCl₂处理细胞24 h后，与对照组相比，GRP78蛋白表达下降（P<0.05）;2.5 mmol/L CaCl₂处理细胞48 h后，与对照组相比，GRP78蛋白表达下降（P<0.05）。结论钙离子促进ALC细胞中KLK4表达上升、细胞活力增加，但较高浓度的钙离子可使ALC细胞的G2/M期阻滞，诱发ALC细胞凋亡，降低凋亡相关蛋白GRP78的表达。

关键词

成釉细胞 / ALC细胞 / 钙离子 / 激肽释放酶4 / 细胞生长 / 细胞活力 / 细胞周期 / 细胞凋亡 / 葡萄糖调节蛋白78