体外沉默ICMT基因对人唾液腺腺样囊性癌细胞侵袭和迁移的影响

摘要

目的 探讨异戊二烯基半胱氨酸羧基甲基转移酶(isoprene cysteine carboxymethyl transferase,ICMT基因对唾液腺腺样囊性癌(salivary adenoid cystic carcinoma,SACC)细胞迁移和侵袭的影响及相关机制,为SACC的分子靶向治疗提供实验依据。方法 体外培养腺样囊性癌细胞SACC-LM和SACC-83，采用脂质体载体瞬时转染的方法，将ICMT siRNA转染至人SACC-LM和SACC-83细胞中(实验组)，并分别设置空白对照组和阴性对照组(转染NC-siRNA)。通过qRT-PCR检测转染后各组细胞中ICMT和RhoA的m RNA表达并明确沉默效率；Western blot检测各组的ICMT、膜RhoA、总RhoA、Rho关联含卷曲螺旋结合蛋白激酶1(Rho associations contain curly helical binding protein kinase 1,ROCK1)、基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)蛋白表达；通过CCK-8实验检测SACC细胞的增殖能力；通过比较细胞划痕实验的相对愈合面积和Transwell实验细胞穿膜数目，分别检测SACC细胞的迁移和侵袭能力。结果 SACC-LM和SACC-83细胞转染ICMT-siRNA后，实验组相较于空白对照组和阴性对照组，ICMT mRNA和蛋白表达显著下降(P<0.05)，但RhoA mRNA和RhoA总蛋白表达均无显著性差异(P>0.05)；膜RhoA、ROCK1、MMP-2、MMP-9的蛋白表达显著下降(P<0.05)，细胞增殖能力明显下降(P<0.05)，迁移和侵袭能力明显降低(P<0.05)。结论 体外沉默ICMT基因可有效抑制人SACC-LM和SACC-83细胞迁移及侵袭能力，其机制可能与RhoA-ROCK信号通路有关。

关键词

腺样囊性癌 / RhoA / 异戊二烯基半胱氨酸羧基甲基转移酶 / 小干扰RNA / 侵袭 / 迁移 / Rho关联含卷曲螺旋结合蛋白激酶1 / 基质金属蛋白酶-2 / 基质金属蛋白酶-9 / RhoA-ROCK信号通路

基金资助

山东省自然科学基金青年项目(ZR2022QC034)