力生长因子对牙周膜干细胞增殖分化的影响

摘要

目的 探讨力生长因子（mechano-growth factor,MGF）对牙周膜干细胞增殖、分化的影响及其作用的分子机制。方法 采用免疫磁珠法分选人牙周膜干细胞（periodontal ligament stem cells,PDLSCs），流式细胞仪检测表面标志物，并观察分选细胞的克隆形成能力及多向分化能力；CCK8法检测不同浓度MGF功能肽段（MGFCt24E肽）作用下PDLSCs的增殖活性；Western blot检测MGF-Ct24E肽作用下PDLSCs中的增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen,PCNA）、碱性螺旋环螺旋转录因子Scleraxis、Ⅰ型胶原ɑ1(collagen type Ⅰ alpha 1,COL1A1)、成骨细胞特异性转录因子Osterix、Yes相关蛋白（Yes-associated protein,YAP）、磷酸化YAP(phosphorylation yes-associated protein,P-YAP)蛋白表达量；免疫荧光观察YAP的表达情况；siRNA干扰YAP表达后，观察PDLSCs中MGF-Ct24E作用下PCNA、Scleraxis和COL1A1的表达。结果 免疫磁珠分选的PDLSCs高表达干细胞表面标志物CD29、CD90、CD105，低表达造血细胞表面标志物CD34、CD45；细胞具有较强的克隆形成能力，成骨诱导茜素红染色后可见红色钙结节，成脂诱导油红O染色后可见红色脂滴；50 ng/mL和100 ng/mL MGF-Ct24E肽作用24 h后，PDLSCs的增殖活性增强（P<0.05）；细胞中PCNA、Scleraxis和COL1A1蛋白表达上调，而Osterix蛋白表达量下调（P<0.05）;50 ng/mL MGF-Ct24E肽作用24 h后，YAP蛋白357位点磷酸化水平增强（P<0.05），免疫荧光染色观察发现，YAP蛋白在胞核聚集；MGF-Ct24E肽作用下，siRNA抑制YAP表达后，细胞中PCNA、Scleraxis蛋白表达量下调（P<0.05）。结论 MGF通过激活YAP促进PDLSCs增殖及成纤维分化。

关键词

力生长因子 / 牙周膜 / 牙周膜干细胞 / 牙周膜成纤维细胞 / Yes相关蛋白 / P-Yes相关蛋白 / 细胞增殖 / 成纤维分化 / 成骨分化 / 再生修复

基金资助

国家自然科学基金项目（31971248;81901052）