miRNA-155-5p与近日节律基因Bmal1对小鼠骨髓间充质干细胞增殖、衰老的影响

摘要

目的 探究近日节律基因Bmal1(brain and muscle arant-like-1)与微小RNA(microRNA,miRNA)中的miRNA-155-5p对小鼠骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells,BMMSCs）增殖能力及衰老的影响，为阐明骨衰老的发生机制提供实验基础。方法 提取1月龄小鼠股骨骨髓腔细胞，采用全骨髓贴壁法纯化培养并传代至P3，流式细胞仪检测BMMSCs表面抗体的荧光表达情况；慢病毒转染BMMSCs，构建miR-155-5p及Bmal1过表达/干扰的BMMSCs稳转细胞系，细胞系由qRT-PCR验证，CCK-8检测miR-155-5p及Bmal1过表达/干扰的4种稳转细胞系增殖活性，流式细胞术检测细胞凋亡率，β-半乳糖苷酶实验检测细胞衰老状况，qRT-PCR检测衰老相关基因P16、P53的表达。结果 慢病毒转染的BMMSCs稳转细胞系构建并鉴定成功。过表达miRNA-155-5p表达后，BMMSCs的增殖活性降低，凋亡率升高，β-半乳糖苷酶活性上调，P16、P53相对表达水平上升；干扰miRNA-155-5p表达，BMMSCs的增殖活性增强，凋亡率降低，β-半乳糖苷酶活性下调，P16、P53相对表达水平下降。过表达/干扰Bmal1表达，上述效应与过表达/干扰miR-155-5p表达相反。结论miRNA-155-5p的表达抑制BMMSCs增殖，促进衰老；Bmal1的表达有利于增强BMMSCs的增殖及抗衰老能力。

关键词

近日节律基因 / 骨髓间充质干细胞 / 慢病毒转染 / 细胞增殖 / 骨衰老 / 组织工程 / 微小RNA / 细胞凋亡 / 流式细胞术 / 干细胞治疗

基金资助

国家自然科学基金项目（81870745,81371113）