体外氧糖剥夺培养条件促进人牙髓细胞内质网应激的研究

摘要

目的通过氧糖剥夺(oxygen-glucose deprivation,OGD)体外模拟细胞缺血缺氧,观察人牙髓细胞(human dental pulp cells,hDPCs)内质网应激变化,为缺血缺氧条件调控hDPCs的机制研究提供依据。方法应用无糖DMEM培养液联合低氧培养(体积分数2%O2)构建hDPCs OGD模型,体外模拟hDPCs缺血缺氧,设置对照组和实验组。对照组:常规培养;实验组:OGD处理0、2、4、8 h。MTT检测hDPCs OGD处理0、2、4、8 h后细胞存活率;qRT-PCR检测h DPCs内质网应激关键分子:剪切X盒结合蛋白1(splicing x-box binding protein 1,sXBP1)、活化转录因子4(activating transcription factor 4,ATF4)、C/EBP同源蛋白(C/EBP homologous protein,chop)mRNA水平,Western blot检测内质网应激关键蛋白:磷酸化蛋白激酶样内质网激酶(phosphorylated RNA-activated protein kinase-like ER-resident kinase,p-perk)、磷酸化真核起始因子-2α(phosphorylated eukaryotic initiation factor-2α,p-eIF2α)表达水平。结果相较于OGD处理0 h,OGD培养hDPCs 2、4、8 h后,死亡细胞增多,细胞存活率显著下降(P<0.05)。与对照组相比,OGD处理4 h后,hDPCs内质网应激关键信号分子sXBP1、ATF4、CHOP mRNA表达水平升高;内质网应激关键蛋白p-perk、p-eIF2α表达增加,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 hDPCs OGD培养条件下内质网应激水平明显升高。

关键词

人牙髓细胞 / 氧糖剥夺 / 内质网应激 / 剪切X盒结合蛋白1 / 活化转录因子4 / C/EBP同源蛋白 / 蛋白激酶样内质网激酶 / 真核起始因子-2α