0 引 言
接骨草为忍冬科(Caprifoliaceae)接骨木属(
Sambucus)植物接骨草(
Sambucus chinensis Lindl.)的干燥茎叶。夏、秋二季采收,清水洗净,切段,晒干。《中药大辞典》
[1]和《海南植物志》
[2]中指出接骨草又名“陆英、蒴藿、臭草、走马风、八棱麻”等,主要分布于海南琼山、澄迈、临高、儋州、东方、乐东、保亭等地。姚元枝等
[3]发现接骨草含绿原酸、
α⁃香树脂素棕榈酸酯、熊果酸、
β⁃谷甾醇、豆甾醇、油菜甾醇、鞣质等活性成分,具有清利湿热,活血散瘀,解毒消肿的功效。《常用中草药手册》
[4]中指出接骨草主治水肿、脚气、脱臼、肾炎、淋浊带下、黄疸、荨麻疹等。部分研究表明接骨草提取物具有抗肝炎、镇痛、活血化瘀、抗菌消炎等药理作用
[5~9]。
接骨草作为海南黎族地区草医常用药材,主要用于祛风除湿、跌打损伤等。《黎族药志》(第二册)中记载
[10],接骨草具有祛风除湿,通经活络,散瘀消肿的功效;此外,《崖州志》
[11]中记载“跌伤骨节,捣烂敷之,可以接骨”。可见海南黎药接骨草在治疗跌打损伤方面具有良好的疗效,值得开展深入研究与开发。目前市场上有陆英片(标准编号WS3⁃B⁃0294⁃90)、陆英颗粒(标准编号WS⁃10990(ZD⁃0990)⁃2002)、陆英冲剂(标准编号WS3⁃B⁃0295⁃90)、陆英糖浆(标准编号WS3⁃B⁃0296)等,陕西省研究制定了《地方习用药材八里麻质量标准》
[12],标准中的陆英药用部位皆为“全草”,本研究中接骨草药材的药用部位为干燥茎叶。2016年海南省食品药品监督管理局与本单位(中国医学科学院药用植物研究所海南分所)签订了“海南黎药药材质量标准制定项目委托协议”,其中就包含了黎药接骨草药材。因此,本研究以海南不同主产地的10批接骨草药材进行质量控制研究,制定接骨草药材质量标准,为该药材的开发利用、质量控制和临床应用提供参考依据。
1 材料和方法
1.1 仪器与样品
①生物显微镜(ECLIPSE80i型),尼康映像仪器销售有限公司;纤维马弗炉(FURNACE1000C),天津市中环实验电炉有限公司;电热恒温鼓风干燥箱(DHG⁃9053A),浙江托普仪器有限公司;紫外分析仪(JY025型),北京君意东方电泳设备有限公司。
②药材来源:10批接骨草药材分别采自海南岛的10个不同产地,包括白沙、五指山、乐东、琼中、保停、陵水、琼海、儋州八个市县,经广东药科大学郑希龙副教授(原中国医学科学院药用植物研究所海南分所副研究员)鉴定。10批接骨草药材均为野生,详细信息见
表1。药材晒干后,粉碎,备用。所采集药材的基源植物为忍冬科接骨木属植物接骨草,茎、叶入药,夏、秋季采收,清水洗净,切段,晒干或在40~50 ℃烘干即得。齐墩果酸对照品(中国食品药品检定研究院,批号:110709⁃201808),其他试剂均为国产分析纯。
1.2 方法
1.2.1 接骨草药材的性状鉴定
采用《中国药典》2015年版(四部)通则0212项下的鉴定方法
[13],对接骨草药材的形状、大小、表面色泽和特征、质地、断面及气味进行观察和描述。
1.2.2 接骨草药材的显微鉴别
参照《中国药典》2015年版的显微鉴别法
[13],取接骨草药材的茎部位,经软化处理后,用徒手切片法,切成10~20 μm的薄片。选取平整的薄片置载玻片上,滴加水合氯醛试液1~2滴,盖上盖玻片,于生物显微镜下观察接骨草药材茎的显微结构。
1.2.3 接骨草药材的薄层色谱鉴别
取接骨草药材粉末1 g,加乙醇10 mL,超声处理30 min,滤过,浓缩至2 mL,作为供试品溶液。另取接骨草对照药材1 g,同法制成对照药材溶液。取齐墩果酸对照品3.8 mg,溶于10 mL乙醇溶液中,作为对照品溶液。参考薄层色谱法试验
[13],吸取上述3种溶液各3 μL,分别点于同一硅胶G薄层板上,以石油醚(60~90 ℃)⁃三氯甲烷⁃无水甲醇⁃冰醋酸(
V石油醚∶
V三氯甲烷∶
V无水甲醇∶
V冰醋酸=36∶15∶5∶0.75)为展开剂,展开,取出晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,105 ℃加热5 min后于日光灯下检视。
1.2.4 接骨草药材的水分、总灰分、浸出物的测定
水分、总灰分、浸出物的测定分别参照《中国药典》2015年版(四部)通则
[13]下的方法进行测定。
2 结果和分析
2.1 药材性状
本品茎呈圆柱状,节略膨大,多分枝。表面灰褐色至灰黑色,老茎有类皮孔样的灰色斑点;具细纵棱,光滑无毛。质坚脆,断面不平整,髓部宽阔,白色至浅棕色。叶多破碎,绿褐色,完整者长椭圆形或披针形,先端渐尖,基部偏斜稍圆至阔楔形,边缘有细密的锐锯齿,如
图1。气微,味微苦。
2.2 显微鉴别
2.2.1 茎横切面
接骨草药材茎横切面为类圆形,幼茎边缘棱线明显而呈波状凹凸,表皮类长方形、类方形及类圆形,外被角质层;具厚角组织,类圆形;维管束外韧型,由大小不等的维管束环状排列,韧皮部为半月形,细胞小而排列紧密,髓部宽广,约占横切半径的二分之一,如
图2所示。成熟茎表皮所被角质层多断裂,皮层细胞形状不规则或被挤压消失,含单个散在的单宁细胞,韧皮部不明显,散在或连续成环;次生木质部均木化,由导管、木纤维、木薄壁细胞及木射线组成,初生木质部明显;皮层及髓部细胞含棕红色鞣质或油滴,如
图3所示。
2.2.2 叶表面观
上表皮细胞多角形,细胞垂周壁平直,气孔为不定式,保卫细胞内壁增厚(
图4A);下表皮细胞不规则形,细胞垂周壁弯曲,气孔为不定式,保卫细胞内壁增厚(
图4B)。
2.3 薄层色谱鉴别
供试品色谱中,在与对照药材色谱及对照品色谱相应位置上,显相同颜色的斑点,见
图5。
2.4 水分、总灰分、浸出物的测定
10批接骨草药材样品的水分、总灰分、浸出物测定结果见
表2。不同批次的接骨草药材,水分和总灰分结果差异较小,浸出物结果差异较大。其中采于五指山水满乡的接骨草药材总灰分和浸出物含量相对最高,而采于琼海石壁镇的接骨草药材总灰分和浸出物含量相对最低;采于白沙牙叉镇的接骨草药材水分含量相对最高,而采于保亭毛感乡和陵水乘坡乡的接骨草药材水分含量相对最低。
3 讨 论
3.1 接骨草药材拉丁学名,中文正名的选择
接骨草是Lindley 根据自我国引种于英国Chiswisk植物园的、初次开花的植物所采标本而定名的,但国内多将本种定为原产东南亚的陆英(
Sambucus javanica Reinw. ex Bl.)的异名
[14],如《海南植物志》
[2]所收录的接骨草为蒴藿(
Sambucus javanica Reinw. ex Bl.),《中药大辞典》
[1]中将陆英(
S. chinensis Lindl.)(
S. javanica Reinw.ex Bl.)一同作为接骨草的学名,借鉴《中国植物志》的说法,本标准研究认为本种目前以选用
S. chinensis Lindl.为其学名比较适当。
古代本草所载的陆英、蒴藿其形态描述基本一致,皆为忍冬科植物接骨草,而性味、毒性说法有所不同,故历代学者争议颇多——《神农本草经》载:陆英,味苦寒
[15];《名医别录》中记载:陆英生熊耳及冤句,立秋采,又曰:蒴藿,味酸、温、有毒
[16]。《唐本草》与《本草纲目拾遗》皆认为陆英与蒴藿为同种植物,李时珍曰:仍当是一物,分根茎花叶用,如苏云所云也
[17],味苦、寒,无毒。《葛氏方》指出:陆英与蒴藿为一物,陆英为花,蒴藿为根茎。后多本草学者论证,接骨草药用部位不同,性味则不同
[18]。本标准研究中接骨草药材取用茎叶部位,故选用蒴藿为植物的中文正名,但“海南黎药药材质量标准制定项目委托协议”中的名称为“接骨草”,故而本文中以“接骨草”代指“蒴藿”。
3.2 鉴别特征
接骨草的性状、显微特征对其生药学鉴别具有实际意义,尤其是茎的皮层含有单宁细胞,在显微镜中很容易观察到,为该属(接骨木属)的一个重要鉴别特征。薄层色谱鉴别具有很强的专属性,而且斑点分离效果好,操作简便易行,以齐墩果酸而言,为接骨草中的有效成分之一,用其对照鉴别药材有很好的使用价值。
3.3 限量标准
照水分测定法(《中国药典》2015年版四部通则0832)
[13]项下的烘干法测定,测定10批接骨草药材水分含量为5.0%~7.5%,根据10批接骨草水分含量平均值乘以120%,得到接骨草水分含量限定标准:6.0%×1.2=7.20%,拟规定接骨草药材水分含量不得过10.0%。
照灰分测定法(《中国药典》2015年版四部通则2302)
[13]项下的总灰分测定法,测定10批接骨草药材总灰分含量为5.8%~8.2%,根据10批接骨草总灰分含量平均值乘以120%,得到接骨草总灰分含量限定标准:7.0%×1.2=8.40%,拟规定接骨草药材总灰分含量不得过10.0%。
照浸出物测定法(《中国药典》2015年版四部通则2201)
[13]项下的热浸法,用95%乙醇作溶剂,测定10批接骨草药材浸出物含量为5.3%~12.7%,根据10批接骨草浸出物含量平均值乘以80%,得到接骨草浸出物含量限定标准:9.9%×0.8=8.52%,拟规定接骨草药材浸出物含量不得少于8.0%。
4 结 语
为验证本文拟定的接骨草药材标准的准确性,依据拟定的标准草案对3批接骨草药材进行自检验证,并提交3批接骨草药材由省级药品检验机构按照拟定的标准草案进行复核验证,本文拟定的标准已通过自检验证和海南省药品检验所复核验证,可判定该标准的准确性。
海南省药品监督管理局委托制定海南黎药药材质量标准项目(2016)
海南省自然科学基金创新研究团队项目(2017CXTD022)