铁皮石斛DobHLH33转录因子启动子的克隆及表达分析

摘要

为初步探究碱性螺旋-环-螺旋（basic helix-loop-helix, bHLH）家族成员DobHLH33基因在铁皮石斛（Dendrobium officinale Kimura et Migo）中的生物学功能，本研究从铁皮石斛中克隆了DobHLH33基因的启动子序列。结果显示，克隆出DobHLH33基因起始密码子上游启动子序列1 821 bp，经PlantCARE预测分析该序列包含逆境胁迫顺式作用元件、光响应元件、激素响应元件、TATA-box、CAAT-box和CAAT-box核心启动子元件等。构建了DobHLH33启动子的β-葡萄糖苷酸酶（β-glucuronidase, GUS）融合表达载体并通过花序浸染获得拟南芥转基因植株。GUS染色结果显示，该启动子能够驱动GUS基因在幼苗及各器官部位叶、花、果、柱头、花粉和叶脉中表达，其中在幼苗中表达最强；转基因幼苗在甘露醇和氯化钠胁迫下，DobHLH33启动子活性受诱导，转基因幼苗GUS染色明显加深。综上所述，DobHLH33可能参与铁皮石斛生长发育以及高盐和渗透胁迫响应，为铁皮石斛bHLH家族的功能研究提供基础和参考依据。

关键词

铁皮石斛 / 启动子 / DobHLH33基因 / 组织化学染色 / 逆境胁迫