蜡样芽胞杆菌产磷脂酶D分离提取及酶学性质研究

摘要

微生物所产磷脂酶D（phospholipase D,PLD）作为生物催化资源，在磷脂改性及稀有磷脂制备中具有重要作用。通过盐析和柱层析对前期筛选的蜡样芽胞杆菌（Bacillus cereus）所产PLD进行分离提取，通过改变温度、pH等条件对该菌所产PLD的酶学性质进行研究，采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE）测定其分子量，以磷脂酰胆碱（phosphatidylcholine,PC）和L-丝氨酸为底物研究其转磷脂酰基反应特性。结果表明，盐析后的沉淀经2步层析，达到电泳纯，比酶活为40.06 U/mg；该菌所产PLD水解酶最适反应pH为8.0,pH在7.0～10.0时，酶活相对稳定；最适反应温度为50℃，50℃及以下酶活稳定；Triton X-100和脱氧胆酸钠对酶活有促进作用，乙二胺四乙酸（ethylene diamine tetraacetic acid,EDTA）对水解酶活性完全抑制，Mg²⁺对酶活有促进作用，Mn²⁺和Co²⁺对酶活有抑制作用；分子量在32 kDa左右。转磷脂酰基反应研究表明，该PLD具有良好的转磷脂酰基酶活性，且基本没有副产物磷脂酸（phosphatidic acid,PA）生成，具有潜在的工业应用价值。

关键词

蜡样芽胞杆菌 / 磷脂酶D / 分离提取 / 酶学性质