0 引 言
海南习用药材藿香蓟（
Ageratum conyzoides）为菊科（Asteraceae）泽兰属（
Eupatorium L.）植物的干燥全草或地上部分。该植物起源于中南美洲，在非洲、印度、印度尼西亚、老挝、柬埔寨、越南等地都有分布。在中国分布于低海拔到2 800 m的地区，包括海南、广东、广西、云南、福建等地，分布的植株有栽培品种，也有归化野生品种
［1］。藿香蓟的化学成分主要包括黄酮类，挥发油、生物碱类等成分，其中所含的化合物主要为早熟素1、早熟素2和石竹烯等
［2］。川陈皮素、异黄酮、甜橙素、胜红蓟黄酮A、B、C等、石松胺、毛聚天芥菜碱、刺凌德革碱等
［3，4］，见
图1。
藿香蓟的药用部位为其全草，味道辛辣、微微泛苦，药性较寒凉。在非洲、美洲、南美洲等地，用此药治疗清热解毒和止血消炎等症状，还对治疗女性的非子宫性阴道出血有十分显著的疗效。在海南，藿香蓟常用于凉血止血，清热解毒，消风止痒
［1］。现代研究表明，其含有的山奈酚具有保护细胞抗氧化应激的功能
［5⁃7］；甜橙素可以改善代谢，包括肥胖、动脉粥样硬化、胰岛素抵抗和炎症等
［8］；川陈皮素对皮肤肿瘤、食管癌和阿尔茨海默等有一定治疗作用
［9⁃12］。
海南习用药材藿香蓟是海南人民长期使用的热带药用植物资源，但目前还未制定出明确的药材质量标准。为确保药材质量的安全、有效及其在防病治病中的作用，本研究拟从性状鉴定、显微鉴定、薄层色谱鉴别、水分、总灰分以及水溶性浸出物等方面制定海南习用药材藿香蓟的质量标准，为进一步控制藿香蓟药材质量、研究与开发藿香蓟药材提供参考
［13］。
1 仪器与试药
1.1 仪器
PL203型千分之一电子天平、LE104E/02型万分之一电子天平（梅特勒⁃托利多仪器（上海）有限公司）；JY025型紫外分析仪（北京君意东方电泳设备有限公司），Nikon ECLPSE80i型生物显微镜（日本尼康），电热恒温鼓风干燥箱（浙江托普仪器有限公司），超声波清洗仪（深圳福洋科技集团有限公司），数显恒温水浴锅（邦西仪器科技有限公司），YTH⁃4⁃10型箱式电阻炉（绍兴市苏珀仪器有限公司），P230Ⅱ高效液相色谱仪（大连依利特分析仪器有限公司）。
1.2 试剂
甜橙素（纯度≥98%）、川陈皮素（纯度≥98%），成都埃法生物科技有限公司；甲醇、甲酸、磷酸、乙酸乙酯、二氯甲烷、乙醇、石油醚，均为国产分析纯（西陇科学）；10%硫酸乙醇溶液、3%三氯化铝乙醇溶液（厦门海标科技有限公司）；乙腈为进口色谱级（赛默飞世尔）；实验用水为纯水（屈臣氏）；硅胶G板、硅胶GF254板（青岛海洋化工厂）。
1.3 样品
本实验10批药材来源为海南琼中、五指山、保亭等地（见
表1），经中国医学科学院药用植物研究所海南分所吴明松鉴定为菊科藿香蓟的全草。10批藿香蓟低温干燥后粉碎，备用。
原植物特征为一年生草本，高50~100 cm。无明显主根。茎粗壮，约4 mm，基部茎不足1 mm，不分枝或自基部或自中部以上分枝，或下基部平卧而节常生不定根。茎被白色尘状短柔毛。叶对生，中部茎叶卵形或椭圆形或长圆形，长3~8 cm，宽2~5 cm；全部叶基部钝或宽楔形，顶端急尖，边缘圆锯齿，有长1~3 cm的叶柄，两面被白色稀疏的短柔毛且有黄色腺点。头状花序在茎顶排成通常紧密的伞房状花序；花序径1.5~3 cm。花梗长0.5~1.5 cm，被尘球短柔毛。总苞钟状或半球形，宽5 mm。总苞片2层，长圆形或披针状长圆形，长3~4 mm，外面无毛
［2］，见
图2。
2 方法
2.1 性状鉴别
参照《中国药典》
［14］2020年版四部的性状鉴定方法，对藿香蓟药材的形状、大小、表面色泽、质地及气味进行鉴定和描述。
2.2 显微鉴别
参照《中国药典》
［14］2020年版四部2001项下的显微鉴别法进行叶横切显微鉴定和粉末显微鉴别。选取平整的薄片置载玻片上，滴加水合氯醛试液1~2滴，盖上盖玻片，于生物显微镜下观察显微结构
［15］。
2.3 薄层鉴别
参照《中国药典》
［14］2020年版四部（通则0502项下）薄层鉴别法进行。
2.3.1 供试品溶液的制备
精密称取藿香蓟粉末1.0 g，置于150 mL锥形瓶中，加入15 mL乙酸乙酯，超声处理30 min，过滤，滤液蒸干，所得残渣用2 mL乙酸乙酯溶解。
2.3.2 藿香蓟药材的薄层色谱鉴别
吸取上述溶液2 μL，点于硅胶G薄层板上，以石油醚⁃乙酸乙酯⁃甲酸（9∶3∶0.2）为展开剂展开，取出，晾干，置紫外光灯（365 nm）下检视。
2.4 水分、总灰分、浸出物检测
水分测定参照2020年版《中国药典》
［14］四部通则 0832项下烘干法及0212项下药材和饮片鉴定通则对水分进行。
总灰分测定参照2020年版《中国药典》
［14］四部通则2302项下灰分测定方法进行。
浸出物测定预实验参照2020年版《中国药典》
［14］四部通则2201项下浸出物测定方法进行，同一供试品分别采用冷浸法和热浸法来进行浸出物的测定。
2.5 含量测定
2.5.1 色谱条件
以phenomenex 5 μm C18（2），250 mm×4.6 mm为色谱柱；以乙腈（A）⁃0.4%磷酸水溶液（B）为流动相，梯度洗脱，洗脱程序为：0~35 min，25%→41%A；35~38 min，41%→45%A；38~70 min，45%→48%A；70~73 min，48%→25%A；73~80 min，25%A；柱温40 ℃；检测波长283 nm；进样量10 μL；流速：0.5 mL/min。
2.5.2 溶液的制备
1） 对照品溶液的制备：分别精密称取甜橙素、川陈皮素对照品适量，加甲醇使溶解，配制成每mL分别含甜橙素0.116 mg、川陈皮素0.1 mg的混合对照品溶液，即得。
2） 含量测定供试品溶液的制备：称取藿香蓟药材粉末（过二号筛）1.0 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇20 mL，称重，超声（功率360 W，频率40 kHz）提取30 min，冷却至室温，称重，用甲醇补重，摇匀，用0.45 μm微孔滤膜过滤，取续滤液，即得。
2.5.3 方法学考察
1） 线性关系考察：精密吸取甜橙素对照品溶液0.2 mL、0.4 mL、0.8 mL、1.6 mL、3.2 mL，分别置于50 mL的容量瓶中，稀释至刻度，摇匀。以峰面积（y）为纵坐标，甜橙素浓度（x）为横坐标，绘制标准曲线。
2） 精密度实验：按照“2.5.1”项下的色谱条件，精密吸取“2.5.2”项下对照品溶液10 μL，连续进样6次。
3） 稳定性实验：取藿香蓟粉末（过二号筛）1.0 g，精密称定，按照“2.5.2”项下的方法制备供试品溶液，然后分别在供试品溶液制备后的0 h、2 h、4 h、6 h、8 h、10 h、12 h，按照“2.5.1”项下色谱条件进样。
4） 重复性实验：取同一批次的藿香蓟粉末（过二号筛）6份，每份1.0 g，精密称定，按照“2.5.2”项下的方法制备供试品溶液，按照“2.5.1”项下色谱条件进样。
5） 加样回收率实验：称取藿香蓟样品各1.0 g，共12份，分别加入5.272 μg/mL的甜橙素对照品溶液1 mL，共6份，分别加入2.777 μg/mL的川陈皮素对照品溶液1 mL，共6份，按照“2.5.2”项下的方法制备供试品溶液，按照“2.5.1”项下色谱条件进样。
2.5.4 藿香蓟样品测定
取10批藿香蓟药材，按照“2.5.2”项下的方法制备供试品溶液，按照“2.5.1”项下色谱条件进样，每批3次平行试验，计算样品中甜橙素、川陈皮素含量。
3 结果与分析
3.1 性状鉴别结果
本品主根呈圆锥状，多有侧根，表面棕褐色。茎呈长条圆柱状，长80~100 cm，直径3.3~5.1 mm；表面褐色或淡黄褐色，表面粗糙；嫩茎表面黄白色，有细纵纹。质脆，易折断，断面黄白色，中空。叶对生，皱缩呈团，完整叶片展平后呈长卵形，长2~7 cm，宽1.5~3.5 cm；浅绿色，叶基部钝或宽楔形，顶端急尖，边缘圆锯齿；叶柄长4~8 cm，被绒毛。花黄白色。气微，味微香，见
图3。
3.2 显微鉴别结果
粉末淡黄色或棕黄色。导管多为具缘纹孔导管和螺纹导管。木纤维细胞长梭形，大多呈束，点状纹孔。表皮细胞类长方形。花粉粒球型，外壁有刺状突起，表面具凹孔。气孔不定式，见
图4。
3.3 薄层色谱鉴别结果
以HXJ20210616001为对照，供试品与对照品药材在相应的位置上显示相同颜色的斑点，实验结果如
图5。
3.4 水分、总灰分、浸出物测定结果
测定10批藿香蓟药材水分含量在6.23%~8.08%，平均值为7.31%，建议规定藿香蓟药材水分含量不得超过9.00%。总灰分含量在5.40%~10.35%，平均值为7.94%，建议规定藿香蓟药材总灰分含量不得超过10.00%。
采用热浸法测得的浸出物含量（14.10±0.1）%高于冷浸法（12.33±0.19）%的测定结果，水溶性浸出物的含量（12.33±0.19）%高于醇溶性浸出物（4.54±0.07）%的含量，故选择水为溶剂的热浸法测定藿香蓟药材浸出物的含量，实验结果见
表2。
10批藿香蓟药材水溶性热浸法浸出物测定结果为14.10%~23.63%，平均值为18.67%，建议规定藿香蓟药材的水溶性热浸法浸出物不低于14.00%。实验结果见
表3。
3.5 含量测定结果
3.5.1 线性关系考察结果
以甜橙素浓度（x）对峰面积（y）进行线性回归，回归方程为y=16 337 x- 1.385 1，R2= 0.999 1，说明甜橙素在0.000 464 0~0.007 424 mg/mL浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系。
以川陈皮素浓度（x）对峰面积（y）进行线性回归，线性回归方程为y=40 946x-9.627 2，R2=0.999 4，说明川陈皮素在0.000 8~0.012 8 mg/mL浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系。
3.5.2 精密度、稳定性、重复性实验结果
计算混合对照品中甜橙素、川陈皮素峰面积的RSD值，RSD分别为0.91%、0.81%，均小于2.00%，结果表明仪器精密度良好。
甜橙素、川陈皮素峰面积RSD分别为1.69%、0.97%，均小于2.00%，表明供试品溶液在12 h内稳定。
甜橙素、川陈皮素含量的RSD分别为1.63%、1.46%，均小于2.00%，表明该方法重复性良好。
3.5.3 加样回收率实验结果
6份样品中甜橙素、川陈皮素的加样回收率分别为97.12%~101.76%、98.27%~102.83%，RSD值分别为1.14%、0.72%。表明本法加样回收率符合要求。
3.5.4 10批藿香蓟样品测定结果
藿香蓟中甜橙素测定结果为29.26~100.9 μg/g，平均值为52.96 μg/g，川陈皮素测定结果为20.37~110.2 μg/g，平均值为55.04 μg/g，实验结果如下（
表4）。鉴于藿香蓟中甜橙素和川陈皮素含量极低，故不规定其含量限值。
4 讨 论
4.1 薄层鉴别条件选择
薄层色谱法操作简便、结果迅速，可快速对样品进行初步鉴别，在鉴别检查中是一种简便、有效的分析方法，可以帮助快速判段样品的成分和纯度，对于中药材的质量控制和鉴别具有重要意义。本研究通过对不同提取溶剂、提取方式比较，表明藿香蓟采用乙酸乙酯溶剂超声提取效果最佳。此外还对薄层板（硅胶G板、硅胶GF254板）、展开剂（甲苯、乙酸乙酯、甲酸、三氯甲烷、水、石油醚）、显色剂（氯化铝无水乙醇溶液、硫酸乙醇溶液）进行全面考察，最终确定以石油醚⁃乙酸乙酯⁃甲酸（4.5∶1.5∶0.1）作为藿香蓟薄层鉴别的展开剂，3%氯化铝无水乙醇作为藿香蓟薄层鉴别的显色剂为最优选。
4.2 结语
本研究以《中国药典》2020年版为指导，对海南不同地区的藿香蓟药材进行性状鉴别、薄层鉴别、甜橙素和川陈皮素的含量测定以及水分、总灰分、浸出物，初步制定出了藿香蓟药材的质量标准
［16］。这一标准的制定，为以藿香蓟药材为原料的产品以及藿香蓟药材的使用提供了鉴别、检验检测的依据；同时，为藿香蓟药材的合理用药与用药标准的进一步研究提供了理论支持。
京公网安备11010202008535号
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